{"id":1534,"date":"2018-11-11T12:50:40","date_gmt":"2018-11-11T11:50:40","guid":{"rendered":"http:\/\/www.newslab.sk\/?p=1534"},"modified":"2018-11-11T12:52:25","modified_gmt":"2018-11-11T11:52:25","slug":"molecular-genetic-diagnostics-of-human-papillomavirus-hpv-and-monitoring-of-hpv-patients","status":"publish","type":"post","link":"https:\/\/www.newslab.sk\/en\/molecular-genetic-diagnostics-of-human-papillomavirus-hpv-and-monitoring-of-hpv-patients\/","title":{"rendered":"Molecular \u2013 genetic diagnostics of Human Papillomavirus (HPV) and monitoring of HPV patients"},"content":{"rendered":"

*All tables, charts, graphs and pictures that are featured in this article can be found in the .pdf attachment at the end of the paper.<\/span> <\/strong><\/p>\n

 <\/p>\n

\u00davod<\/strong><\/p>\n

V s\u00fa\u010dasnosti sa \u013eudsk\u00fd papilomav\u00edrus (HPV \u2013 Human Papillomavirus) pova\u017euje za z\u00e1kladn\u00fd etiologick\u00fd faktor sp\u00f4sobuj\u00faci rakovinu kr\u010dka maternice, preto\u017ee bez infekcie HPV nie je mo\u017en\u00fd v\u00fdvoj prekancer\u00f3znych stavov s n\u00e1sledn\u00fdm progresom do cervik\u00e1lneho karcin\u00f3mu. \u013dudsk\u00e9 papilomav\u00edrusy sa zara\u010fuj\u00fa do \u010de\u013eade Papillomaviridae<\/em>, pri\u010dom ide o mal\u00e9 neobalen\u00e9 dvojvl\u00e1knov\u00e9 DNA v\u00edrusy s gen\u00f3mom ve\u013ekosti pribli\u017ene 8 000 bp. Patria medzi epiteliotropn\u00e9 v\u00edrusy zodpovedn\u00e9 za cytopatick\u00fd efekt ko\u017en\u00e9ho a slizni\u010dn\u00e9ho epitelu. Gen\u00f3m v\u00edrusu (obr\u00e1zok 1) <\/em><\/strong>obsahuje 8 \u2013 10 g\u00e9nov a sklad\u00e1 sa z troch funk\u010dn\u00fdch oblast\u00ed \u2013 nek\u00f3duj\u00faca regula\u010dn\u00e1 oblas\u0165 (LCR \u2013 long control region), oblas\u0165 so skoro prepisuj\u00facimi sa g\u00e9nmi (Early genes) E1, E2, E3, E4, E5, E6 a E7 a oblas\u0165 s neskoro prepisuj\u00facimi sa g\u00e9nmi (Late genes) \u2013 L1 a L2, ktor\u00e9 k\u00f3duj\u00fa majoritn\u00fd a minoritn\u00fd v\u00edrusov\u00fd kapsidov\u00fd prote\u00edn a tvoria a\u017e 85 \u2013 90 % celkovej hmotnosti v\u00edrusu. Regula\u010dn\u00e1 oblas\u0165 obsahuje v\u00e4zbov\u00e9 miesta pre v\u00edrusov\u00e9 prote\u00edny E1 a E2, prom\u00f3tory (P1, P2, P3 a P4) a v\u00e4zbov\u00e9 miesta pre transkrip\u010dn\u00e9 faktory. Oblas\u0165 so skoro prepisuj\u00facimi sa g\u00e9nmi obsahuje g\u00e9ny pre regula\u010dn\u00e9 prote\u00edny E1 \u2013 E8. Prote\u00edny E1 a E2 s\u00fa zodpovedn\u00e9 za replik\u00e1ciu a transkripciu v\u00edrusu, E4 je neskor\u00fd prote\u00edn, ktor\u00fd uvo\u013e\u0148uje nov\u00e9 v\u00edrusov\u00e9 \u010dastice z hostite\u013eskej bunky. Multifunk\u010dn\u00fd prote\u00edn E5 spolu s onkog\u00e9nnymi prote\u00ednmi E6 a E7 ovplyv\u0148uje mechanizmus regul\u00e1cie bunkov\u00e9ho cyklu(1,2).<\/p>\n

Celkovo existuje viac ako 200 r\u00f4znych druhov HPV schopn\u00fdch infikova\u0165 \u013eudsk\u00fd organizmus(3), z toho 30 \u2013 40 druhov je sexu\u00e1lne prenosn\u00fdch, schopn\u00fdch infekcie predov\u0161etk\u00fdm\u00a0viacvrstvov\u00e9ho dla\u017edicov\u00e9ho epitelu kr\u010dka maternice, kde sa n\u00e1sledne podie\u013eaj\u00fa na vzniku n\u00e1dorov\u00fdch procesov v anogenit\u00e1lnej oblasti. Na z\u00e1klade typu hyperplastickej l\u00e9zie epitelu mo\u017eno HPV rozdeli\u0165 do dvoch skup\u00edn \u2013 HPV infikuj\u00face ko\u017eu a HPV infikuj\u00face sliznicu. Na z\u00e1klade stup\u0148a korel\u00e1cie medzi infekciou HPV a v\u00fdvojom rakoviny kr\u010dka maternice s\u00fa jednot- liv\u00e9 typy papilomav\u00edrusov rozdelen\u00e9 do dvoch kateg\u00f3ri\u00ed \u2013 1. lrHPV (n\u00edzkorizikov\u00e9 typy HPV) a 2. hrHPV (vysokorizikov\u00e9 typy HPV). LrHPV s\u00fa zodpovedn\u00e9 za vznik ben\u00edgnych n\u00e1dorov vo forme genit\u00e1lnych bradavicovit\u00fdch v\u00fdrastkov, papil\u00f3mov a kondyl\u00f3mov. Naj\u010dastej\u0161ie vyskytuj\u00face sa lrHPV typu 6 a 11 s\u00fa pr\u00edtomn\u00e9 vo viac ako 70 % condylomata accuminata<\/em>, pri\u010dom ostatn\u00fdch 30 % kondyl\u00f3mov sp\u00f4sobuj\u00fa zvy\u0161n\u00e9 lrHPV. HrHPV d\u00e1vaj\u00fa podklad vzniku cervik\u00e1lnych dyspl\u00e1zi\u00ed, pr\u00edpadne a\u017e invaz\u00edvneho karcin\u00f3mu kr\u010dka maternice(1). Taktie\u017e s\u00fa sp\u00e1jan\u00e9 s or\u00e1lnymi alebo in\u00fdmi anogenit\u00e1lnymi malignitami. Zo v\u0161etk\u00fdch 14 hrHPV typov (16, 18, 31, 33, 35, 39, 45, 51, 52, 56, 58, 59, 66 a 68) je zn\u00e1me, \u017ee typy HPV 16 a HPV 18 predstavuj\u00fa pribli\u017ene 70 % pr\u00edpadov rakoviny kr\u010dka maternice(4). Bolo zisten\u00e9, \u017ee hrHPV zohr\u00e1vaj\u00fa d\u00f4le\u017eit\u00fa \u00falohu nielen pri vzniku cervik\u00e1lneho karcin\u00f3mu, ale aj v etiol\u00f3gii in\u00fdch malign\u00edt, karcin\u00f3mu penisu, kone\u010dn\u00edka, ko\u017ee, pr\u00edpadne niektor\u00fdch malign\u00edt horn\u00fdch d\u00fdchac\u00edch ciest.<\/p>\n

 <\/p>\n

Korel\u00e1cia medzi HPV infekciou a rakovinou kr\u010dka\u00a0maternice<\/strong><\/h3>\n

Je preuk\u00e1zan\u00e9, \u017ee \u013eudsk\u00fd papilomav\u00edrus zodpoved\u00e1 za viac ako 99,7 % v\u0161etk\u00fdch pr\u00edpadov cervik\u00e1lneho karcin\u00f3mu(6). Samotn\u00e1 infekcia cervik\u00e1lnych epitelov\u00fdch buniek vysokorizikov\u00fdmi typmi HPV m\u00e1 odli\u0161n\u00e9 formy. M\u00f4\u017ee \u00eds\u0165 o prechodn\u00fa infekciu, ktor\u00e1 je asymptomatick\u00e1 a nepreukazuje \u017eiadnu pr\u00edtomnos\u0165 patologick\u00fdch zmien v epitelov\u00fdch bunk\u00e1ch kr\u010dka maternice, respekt\u00edve preukazuje len pr\u00edtomnos\u0165 ben\u00edgnych bradav\u00edc a\u017e po vysokoinvaz\u00edvny cervik\u00e1lny karcin\u00f3m, ktor\u00fd je v\u00fdsledkom pr\u00e1ve perzistentnej \u010di transformuj\u00facej sa infekcie. Pr\u00e1ve perzistentn\u00e1 infekcia je z\u00e1kladnou pr\u00ed\u010dinou cervik\u00e1lneho karcin\u00f3mu a jeho prekurzorov \u2013 cervik\u00e1lnych intraepitelov\u00fdch neopl\u00e1zi\u00ed (CIN), ktor\u00e9 predstavuj\u00fa zmenu v baz\u00e1lnych epitelov\u00fdch bunk\u00e1ch s n\u00e1sledn\u00fdm v\u00fdvojom prekancer\u00f3znych l\u00e9zi\u00ed a v kone\u010dnom d\u00f4sledku aj so vznikom cervik\u00e1lneho karcin\u00f3mu(1).<\/p>\n

Hoci perzistentn\u00e1 infekcia hrHPV sa pova\u017euje za hlavn\u00fa pr\u00ed\u010dinu cervik\u00e1lneho karcin\u00f3mu a jeho prekurzorov\u00fdch l\u00e9zi\u00ed, ve\u013emi n\u00edzke percento infekci\u00ed hrHPV sa vyvinie a\u017e do \u0161t\u00e1dia cervik\u00e1lneho karcin\u00f3mu. Sexu\u00e1lne prenosn\u00e1 infekcia \u013eudsk\u00fdm papilomav\u00edrusom nie je v \u017eiadnom pr\u00edpade ojedinelou z\u00e1le\u017eitos\u0165ou, av\u0161ak vo viac ako v 90 % pr\u00edpadov infikovan\u00fdch \u017eien vznikne imunitn\u00e1 odpove\u010f, ktor\u00e1 n\u00e1sledne potla\u010d\u00ed infekciu v priebehu 6 a\u017e 24 mesiacov bez ak\u00fdchko\u013evek dlhodob\u00fdch zdravotn\u00fdch n\u00e1sledkov(7). Infekcia ktor\u00fdmko\u013evek typom HPV m\u00f4\u017ee vyvola\u0165 vznik cervik\u00e1lnych intraepitelov\u00fdch neopl\u00e1zi\u00ed, ktor\u00e9 v\u0161ak po potla\u010den\u00ed infekcie imunitn\u00fdm syst\u00e9mom zvy\u010dajne zanikn\u00fa. Vzh\u013eadom na to, \u017ee v\u00edrus je v popul\u00e1cii prenosn\u00fd jednoduch\u00fdm sp\u00f4sobom, infekcia HPV je pomerne \u010dast\u00e1 z\u00e1le\u017eitos\u0165, pri\u010dom sa odhaduje, \u017ee a\u017e 80 % sexu\u00e1lne akt\u00edvnej popul\u00e1cie je infikovan\u00fdch e\u0161te pred dosiahnut\u00edm 50 roku \u017eivota(6). \u010co sa t\u00fdka prevalencie HPV, t\u00e1 je najvy\u0161\u0161ia u mlad\u00fdch \u017eien do 25 rokov(8), av\u0161ak najvy\u0161\u0161\u00ed v\u00fdskyt rakoviny kr\u010dka maternice je u \u017eien okolo 40. roku \u017eivota.<\/p>\n

Rakovina kr\u010dka maternice sa zara\u010fuje medzi druh\u00e9 naj\u010dastej\u0161ie onkologick\u00e9 ochorenie u \u017eien v celosvetovom rebr\u00ed\u010dku a tretie v Eur\u00f3pe, pri\u010dom je jedn\u00fdm z ochoren\u00ed, ktor\u00e9 postihuje vo v\u0161eobecnosti najm\u00e4 \u017eeny v produkt\u00edvnom veku(9). Je pova\u017eovan\u00e9 za ochorenie, ktor\u00e9 je ako jedno z m\u00e1la onkologick\u00fdch ochoren\u00ed \u013eahko diagnostikovate\u013en\u00e9 a rovnako aj efekt\u00edvne lie\u010dite\u013en\u00e9. Takmer 90 % v\u0161etk\u00fdch \u00famrt\u00ed na rakovinu kr\u010dka maternice prisl\u00facha pr\u00e1ve rozvojov\u00fdm krajin\u00e1m, \u010do odr\u00e1\u017ea rozdiely v dostupnosti cervik\u00e1lneho skr\u00edningu a prevalencie infekcie HPV. Hlavn\u00fdm rizikov\u00fdm faktorom vzniku cervik\u00e1lneho karcin\u00f3mu je vysok\u00e1 promiskuita, s ktorou s\u00favis\u00ed sexu\u00e1lne prenosn\u00e1 infekcia HPV. Medzi \u010fal\u0161ie rizikov\u00e9 faktory patr\u00ed aj tehotenstvo v n\u00edzkom veku, faj\u010denie, trval\u00e9 u\u017e\u00edvanie antikoncepcie, socioekonomick\u00fd status a imunitn\u00e1 od- pove\u010f(10).<\/p>\n

 <\/p>\n

Cervik\u00e1lna intraepitelov\u00e1 neopl\u00e1zia a karcinogen\u00e9za<\/h3>\n

Karcinogen\u00e9za cervik\u00e1lneho karcin\u00f3mu je nieko\u013ekostup\u0148ov\u00fd proces, v prvom rade sprev\u00e1dzan\u00fd infekciou HPV, perzistenciou v\u00edrusu vo forme epiz\u00f3mu a jeho n\u00e1slednou lineariz\u00e1ciou a integr\u00e1ciou do hostite\u013esk\u00e9ho gen\u00f3mu. Len \u010do je gen\u00f3m HPV v priebehu karcinogen\u00e9zy integrovan\u00fd do chromoz\u00f3mu hostite\u013eskej bunky, v\u00fdsledkom je okam\u017eit\u00e1 expresia onkog\u00e9nnych prote\u00ednov E6 a E7. Nadmern\u00e1 expresia onkog\u00e9nneho prote\u00ednu E6 zr\u00fdch\u013euje degrad\u00e1ciu n\u00e1dorov\u00e9ho supresorov\u00e9ho prote\u00ednu p53 a v\u00e4zba onkog\u00e9nneho prote\u00ednu E7 inaktivuje tumorsupresorov\u00fd prote\u00edn pRB. Schopnos\u0165 prote\u00ednov E6 a E7 viaza\u0165 a deregulova\u0165 bunkov\u00e9 regul\u00e1tory prote\u00ednov\u00fdch komplexov vedie po\u010das prolifer\u00e1cie k aktiv\u00e1cii mal\u00edgnej transform\u00e1cie indukovanej HPV(11). Strata funkcie n\u00e1dorov\u00fdch supresorov prispieva k procesu mal\u00edgnej transform\u00e1cie, preto\u017ee vo vysokej miere ovplyv\u0148uj\u00fa prolifer\u00e1ciu buniek a n\u00e1sledn\u00fa diferenci\u00e1ciu a apopt\u00f3zu. Z tohto d\u00f4vodu onkog\u00e9nne prote\u00edny E6 a E7 prispievaj\u00fa k progresii karcin\u00f3mu kr\u010dka maternice, av\u0161ak ich transkrip\u010dn\u00e1 schopnos\u0165 bola preuk\u00e1zan\u00e1 v\u00fdlu\u010dne pri hrHPV, pri ostatn\u00fdch typoch HPV ich onkog\u00e9nna aktivita preuk\u00e1zan\u00e1 nebola(11). Mal\u00edgna transform\u00e1cia je proces sprev\u00e1dzan\u00fd v\u00fdvojom cez cervik\u00e1lne intraepitelov\u00e9 neopl\u00e1zie (CIN) charakterizovan\u00e9 abnorm\u00e1lnou bunkovou prolifer\u00e1ciou.<\/p>\n

Prekancer\u00f3zne zmeny kr\u010dka maternice s\u00fa sledovan\u00e9 prostredn\u00edctvom cervik\u00e1lneho cytologick\u00e9ho vy\u0161etrenia zo steru buniek z kr\u010dka maternice. Naj\u010dastej\u0161\u00edm miestom vzniku spom\u00ednan\u00fdch prekancer\u00f3znych l\u00e9zi\u00ed, respekt\u00edve n\u00e1dorov\u00fdch stavov, je miesto medzi dla\u017edicov\u00fdm a cylindrick\u00fdm epitelom v mieste transforma\u010dnej z\u00f3ny, kde v\u00edrus infikuje bunky baz\u00e1lnej vrstvy epitelu cez mikroskopick\u00e9 poranenia alebo pria- mym kontaktom(12). Tak\u00e9to zmeny s\u00fa na z\u00e1klade histol\u00f3gie klasifikovan\u00e9 ako cervik\u00e1lne intraepitelov\u00e9 neopl\u00e1zie (CIN), ktor\u00e9 sa rozde\u013euj\u00fa do troch \u0161t\u00e1di\u00ed: CIN I (dyspl\u00e1zia mierneho stup\u0148a), CIN II (dyspl\u00e1zia stredn\u00e9ho stup\u0148a) a CIN III (\u0165a\u017ek\u00e1 dyspl\u00e1zia zahr\u0148uj\u00faca aj karcin\u00f3m in situ<\/em>) (obr\u00e1zok 2)<\/em><\/strong>. Pri histologickom n\u00e1leze CIN I s\u00fa vidite\u013en\u00e9 zmeny v dolnej tretine epitelu s poru\u0161en\u00edm diferenci\u00e1cie buniek. Pri CIN II sa nach\u00e1dzaj\u00fa abnorm\u00e1lne bunky v doln\u00fdch dvoch tretin\u00e1ch epitelu, pri\u010dom zmeny v epitelov\u00fdch bunk\u00e1ch s\u00fa rovnak\u00e9 ako pri histologickom \u0161t\u00e1diu CIN I. V pr\u00edpade \u0165a\u017ekej dyspl\u00e1zie ozna\u010dovanej ako CIS (carcinoma in situ<\/em>) alebo CIN III\/CIS ide o poruchu diferenci\u00e1cie buniek v celej vrstve epitelu(11) (obr\u00e1zok 3)<\/em><\/strong>.<\/p>\n

 <\/p>\n

Cytologick\u00fd cervik\u00e1lny skr\u00edning<\/h3>\n

Rakovina kr\u010dka maternice sa vo v\u0161eobecnosti pova\u017euje za ochorenie skr\u00edningom dobre sledovate\u013en\u00e9, preto\u017ee prekancer\u00f3zy sa vyv\u00edjaj\u00fa v pomerne dlhom \u010dasovom horizonte a s\u00fa \u013eahko lie\u010dite\u013en\u00e9. V s\u00fa\u010dasnosti s\u00fa k dispoz\u00edcii prebioptick\u00e9 met\u00f3dy ako cytologick\u00fd skr\u00edning, respekt\u00edve sledovanie pr\u00edtomnosti infekcie HPV, ktor\u00e9 sl\u00fa\u017eia na diagnostiku prekancer\u00f3z. Ide o pomerne lacn\u00e9, pacientku neza\u0165a\u017euj\u00face a z\u00e1rove\u0148 dostato\u010dne efekt\u00edvne met\u00f3dy. Jednou z nich je pr\u00e1ve cytologick\u00fd cervik\u00e1lny skr\u00edning, ktor\u00fd sl\u00fa\u017ei na vy\u0161etrovanie popul\u00e1cie \u017eien s cie\u013eom detekcie bunkov\u00fdch abnormal\u00edt sk\u00f4r, ako m\u00f4\u017eu progredova\u0165 a\u017e na \u00farove\u0148 prekancer\u00f3z ale- bo ran\u00fdch \u0161t\u00e1di\u00ed cervik\u00e1lneho karcin\u00f3mu. Spolu s kolposkopiou a diagnostikou pr\u00edtomnosti hrHPV patria medzi diagnostick\u00e9 met\u00f3dy podie\u013eaj\u00face sa na odhalen\u00ed dysplastick\u00fdch zmien na kr\u010dku maternice. \u0160tandardn\u00e9 cytologick\u00e9 vy\u0161etrenie n\u00e1teru epitelov\u00fdch buniek kr\u010dka maternice (PAP test) je u\u017e mnoho rokov \u0161tandardnou skr\u00edningovou met\u00f3dou zni\u017euj\u00facou v\u00fdskyt rakoviny kr\u010dka maternice o 60 \u2013 90 % a \u00famrtnos\u0165 a\u017e o 90 %. Obmedzen\u00edm tohto testu je v\u0161ak pomerne n\u00edzka senzitivita, ktor\u00e1 sa pribli\u017euje k 50 %, a to najm\u00e4 v interpret\u00e1cii atypick\u00fdch skvam\u00f3znych buniek nezn\u00e1meho p\u00f4vodu (ASC-US) a skvam\u00f3zne intraepitelov\u00fdch l\u00e9zi\u00ed n\u00edzkeho stup\u0148a (L-SIL)(18), ako aj v\u00fdrazn\u00fd podiel nehodnotite\u013en\u00fdch vzoriek. Z tohto d\u00f4vodu bol ako s\u00fa\u010das\u0165 cervik\u00e1lneho skr\u00edningu, ktor\u00fd interpretuje jednotliv\u00e9 n\u00e1lezy pod\u013ea Bethesda syst\u00e9mu(14), zaraden\u00fd test na detekciu pr\u00edtomnosti vysokorizikov\u00fdch typov \u013eudsk\u00fdch papilomav\u00edrusov. Z\u00e1kladom cervik\u00e1lnej cytol\u00f3gie je ster \u0161peci\u00e1lnou odberovou kefkou, ktor\u00fd obsahuje epitelov\u00e9 bunky z povrchu endocervixu, exocervixu, epitelov\u00e9 bunky transforma\u010dnej z\u00f3ny. Dnes m\u00e1me k dispoz\u00edcii dva odli\u0161n\u00e9 sp\u00f4soby cytologick\u00e9ho vy\u0161etrenia. Klasick\u00e1 (konven\u010dn\u00e1) cytol\u00f3gia zah\u0155\u0148a odber buniek z transforma\u010dnej z\u00f3ny kr\u010dka maternice sterom pomocou odberov\u00fdch \u0161pachtl\u00ed a \u0161tet\u00f4\u010dok, n\u00e1sledn\u00fdm natret\u00edm buniek na cytologick\u00e9 podlo\u017en\u00e9 skl\u00ed\u010dko, kde nasleduje okam\u017eit\u00e1 fix\u00e1cia buniek na b\u00e1ze alkoholick\u00fdch roztokov (metylalkohol, izopropylalkohol) a v laborat\u00f3riu polychromatick\u00e9 farbenie pod\u013ea Papanicolauovej met\u00f3dy. Ako s\u00fa\u010das\u0165 cytologick\u00e9ho vy\u0161etrenia sa dnes dost\u00e1va do popredia inovat\u00edvny typ cytologick\u00e9ho vy\u0161etrenia \u2013 Liquid Based Cytology (LBC) alebo cytol\u00f3gia na tekutom z\u00e1klade. Tento druh odberov\u00e9ho syst\u00e9mu posunul cytologick\u00e9 vy\u0161etrenie na vy\u0161\u0161iu \u00farove\u0148, preto\u017ee v\u00fdhodou tejto met\u00f3dy je \u010distej\u0161\u00ed cytologick\u00fd materi\u00e1l v porovnan\u00ed s klasickou (konven\u010dnou) cytol\u00f3giou, rovnako to, \u017ee 2- a\u017e 4-n\u00e1sobne zvy\u0161uje z\u00e1chyt premal\u00edgnych l\u00e9zi\u00ed. V\u00fdhodou je takisto fakt, \u017ee z materi\u00e1lu tej istej vzorky mo\u017eno vy\u0161etri\u0165 HPV, aj HSV, Chlamy<\/em>dia<\/em> tr<\/em>acho<\/em>– <\/em>matis <\/em>alebo Neiserie gonorrhoeae<\/em>.<\/p>\n

V podmienkach Slovenskej republiky (SR) m\u00e1 ka\u017ed\u00e1 pacientka vo veku 23 \u2013 64 rokov v r\u00e1mci prevent\u00edvnej gynekologickej prehliadky n\u00e1rok na cervik\u00e1lny cytologick\u00fd skr\u00edning, pri\u010dom periodicita je nasledovn\u00e1: prv\u00e9 dva odbery cervik\u00e1lnej cytol\u00f3gie s\u00fa v ro\u010dnom intervale. V pr\u00edpade negativity t\u00fdchto dvoch cytologick\u00fdch n\u00e1lezov sa pokra\u010duje v trojro\u010dnom intervale do veku 64 rokov. Skr\u00edning sa vo veku 64 rokov ukon\u010d\u00ed, ak bud\u00fa posledn\u00e9 tri cytologick\u00e9 n\u00e1lezy negat\u00edvne. V pr\u00edpade pozit\u00edvneho n\u00e1lezu je interval kontrolnej cytol\u00f3gie 3 a\u017e 6 mesiacov, respekt\u00edve je odporu\u010den\u00e9 kolposkopick\u00e9 vy\u0161etrenie, histologick\u00e9 vy\u0161etrenie a testovanie pr\u00edtomnosti vysokorizikov\u00fdch typov \u013eudsk\u00fdch papilomav\u00edrusov(15).<\/p>\n

 <\/p>\n

Laborat\u00f3rna diagnostika \u013eudsk\u00e9ho papilomav\u00edrusu\u00a0(HPV)<\/strong><\/h3>\n

Diagnostika pr\u00edtomnosti infekcie HPV prostredn\u00edctvom molekulovogenetickej laborat\u00f3rnej diagnostiky m\u00f4\u017ee by\u0165 realizovan\u00e1 testovan\u00edm na b\u00e1ze DNA alebo mRNA. V oboch pr\u00edpadoch HPV testovania je sledovan\u00e1 pr\u00edtomnos\u0165 14 vysokorizikov\u00fdch typov HPV (16, 18, 31, 33, 35, 39, 45, 51, 52, 56, 58, 59, 66 a 68). HPV je na Slovensku diagnostikovan\u00e9 \u017een\u00e1m nad 30 rokov s cytologick\u00fdm n\u00e1lezom ASC-US, po koniza\u010dn\u00fdch a abla\u010dn\u00fdch v\u00fdkonoch na kr\u010dku maternice, ktor\u00e9 boli vykonan\u00e9 z d\u00f4vodu lie\u010dby dyspl\u00e1zie alebo mikroinvaz\u00edvneho karcin\u00f3mu cervix, respekt\u00edve v in\u00fdch pr\u00edpadoch pod\u013ea indik\u00e1cie lek\u00e1ra so \u0161pecializ\u00e1ciou onkol\u00f3gia v gynekol\u00f3gii.<\/p>\n

 <\/p>\n

cobas<\/em><\/strong>\u00ae 4800 HPV<\/strong><\/p>\n

Pr\u00edtomnos\u0165 HPV infekcie na \u00farovni DNA je testovan\u00e1 prostredn\u00edctvom molekulovogenetickej laborat\u00f3rnej diagnostiky technol\u00f3giou cobas\u00ae 4800 HPV (Roche Molecular Diagnostics, CA, USA), ktor\u00fd deteguje amplik\u00f3ny HPV DNA dlh\u00e9 200 bp majoritn\u00e9ho kapsidov\u00e9ho prote\u00ednu L1 u 14 hrHPV typov (16, 18, 31, 33, 35, 39, 45, 51, 52, 56, 58, 59, 66 a 68) zo steru epitelov\u00fdch buniek kr\u010dka maternice(16). Identifikovan\u00e1 pr\u00edtomnos\u0165 oblasti v\u00edrusovej DNA potvrdzuje pr\u00edtomnos\u0165 HPV, \u010do v\u0161ak neznamen\u00e1 jednozna\u010dne aktivitu v\u00edrusu a v mnoh\u00fdch pr\u00edpadoch m\u00f4\u017ee by\u0165 samovo\u013ene potla\u010den\u00fd imunitn\u00fdm syst\u00e9mom hostite\u013ea bez ak\u00fdchko\u013evek sprievodn\u00fdch pr\u00edznakov, \u010do na druhej strane \u010dasto vedie k falo\u0161ne pozit\u00edvnym v\u00fdsledkom met\u00f3dy. Ide o automatizovan\u00fd kvalitat\u00edvny test na pou\u017eitie in vitro <\/em>detekcie hrHPV. Zalo\u017een\u00fd je na s\u00fabe\u017enej extrakcii HPV a celul\u00e1rnej DNA, amplifik\u00e1cii PCR sekvenci\u00ed cie\u013eovej DNA so s\u00fa\u010dasn\u00fdm pou\u017eit\u00edm HPV a \u03b2-glob\u00ednov\u00fdch \u0161pecifick\u00fdch komplement\u00e1rnych primerov a na detekcii flourescen\u010dne zna\u010den\u00fdch HPV a \u03b2-glob\u00ednov\u00fdch \u0161pecifick\u00fdch oligonukleotidov\u00fdch detek\u010dn\u00fdch sond prostredn\u00edctvom Real-Time PCR technol\u00f3giou LightCycler\u00ae 480(16). N\u00e1sledne sa extrakciou, amplifik\u00e1ciou a detekciou \u03b2-glob\u00ednu testovac\u00ed proces ukon\u010d\u00ed. Vo v\u00fdsledku s\u00fa typy HPV 16 a 18 detegovan\u00e9 samostatne ako pozit\u00edvne alebo negat\u00edvne a ostatn\u00fdch 12 hrHPV typov je detegovan\u00fdch spolo\u010dne.<\/p>\n

Test je indikovan\u00fd ako s\u00fa\u010das\u0165 skr\u00edningu pacientov s cytologick\u00fdm n\u00e1lezom ASC-US na ur\u010denie potreby kolposkopie, respekt\u00edve na identifik\u00e1ciu pr\u00edtomnosti genotypov HPV 16 a HPV 18, preto\u017ee ich detekcia je odpor\u00fa\u010dan\u00e1 na sledovanie \u017eien, ktor\u00e9 s\u00fa pozit\u00edvne na hrHPV a z\u00e1rove\u0148 s cytologicky negat\u00edvnymi v\u00fdsledkami, \u017eien vo veku nad 30 rokov spolu s PAP testom ako s\u00fa\u010das\u0165 cervik\u00e1lneho skr\u00edningu, ako aj na ur\u010denie pr\u00edtomnosti hrHPV a na identifik\u00e1ciu pr\u00edtomnosti typov HPV 16 a HPV 18(16).<\/p>\n

 <\/p>\n

Aptima HPV Assay<\/h4>\n

Aptima HPV Assay je amplifika\u010dn\u00fd test cie\u013eovej sondy nukleovej kyseliny na in vitro <\/em>kvalitat\u00edvnu detekciu E6 a E7 v\u00edrusovej mRNA zo 14 hrHPV typov (16, 18, 31, 33, 35, 39, 45, 51, 52, 56, 58, 59, 66 a 68)(17). Test nerozli\u0161uje medzi 14 hrHPV, nezis\u0165uje pr\u00edtomnos\u0165 HPV DNA, ale deteguje integr\u00e1ciu v\u00edrusov\u00e9ho gen\u00f3mu a genetick\u00e9 zmeny v epitelov\u00fdch bunk\u00e1ch kr\u010dka maternice. Inak povedan\u00e9, deteguje pr\u00edtomnos\u0165 hrHPV, ktor\u00fdch DNA sa u\u017e v hostite\u013esk\u00fdch bunk\u00e1ch exprimuje a v plnej miere sa m\u00f4\u017ee prejavi\u0165 karcinog\u00e9nny efekt v\u00edrusu. V tomto pr\u00edpade ide o detekciu perzistentnej infekcie hrHPV, pri ktorej je takmer ist\u00fd progres n\u00e1dorov\u00e9ho procesu v epitelov\u00fdch bunk\u00e1ch kr\u010dka maternice. Ke\u010f\u017ee expresia onkog\u00e9nnych prote\u00ednov E6 a E7 pri hrHPV typoch men\u00ed funkcie bunkov\u00fdch prote\u00ednov p53 a pRB, je d\u00f4le\u017eit\u00e9 sledova\u0165 ich ex- presiu, preto\u017ee vedie k naru\u0161eniu kontroln\u00fdch bodov bunkov\u00e9ho cyklu v zmysle mal\u00edgnej transform\u00e1cie. Aj z tohto d\u00f4vodu s\u00fa mRNA testy vhodnej\u0161ie pri predikcii CIN2.<\/p>\n

Mechanizmus Aptima HPV Assay zah\u0155\u0148a tri hlavn\u00e9 kroky, ktor\u00e9 sa vykon\u00e1vaj\u00fa v jednej sk\u00famavke: zachytenie cie\u013ea a jeho amplifik\u00e1cia pomocou transkrip\u010dne sprostredkovanej amplifik\u00e1cie (Transcription \u2013 Mediated Amplification \u2013 TMA), n\u00e1sledn\u00e1 detekcia amplik\u00f3nov pomocou testu hybridiza\u010dnej ochrany (Hybridization Protection Assay \u2013 HPA)(17). Detekcia amplik\u00f3nov je realizovan\u00e1 pr\u00f3bou jednore\u0165azovej nukleovej kyseliny chemiluminiscen\u010dne a zna\u010den\u00e9 pr\u00f3by \u0161pecificky hybridizuj\u00fa a amplik\u00f3nom. Zna\u010den\u00e9 sondy nukleovej kyseliny hybridizuj\u00fa \u0161pecificky s amplik\u00f3nom. Selek\u010dn\u00e1 reagencia n\u00e1sledne rozli\u0161uje hybridizovan\u00fa sondu od nehybridizovanej deaktiv\u00e1ciou zna\u010denia nehybridizovanej sondy. Po\u010das detek\u010dn\u00e9ho kroku je svetlo vy\u017earovan\u00e9 z ozna\u010den\u00fdch hybridov RNA : DNA, meran\u00e9 ako fot\u00f3nov\u00e9 sign\u00e1ly v luminometrii, a intenzita je hl\u00e1sen\u00e1 ako relat\u00edvne sveteln\u00e9 jednotky (RLU). V\u00fdsledok je interpretovan\u00fd ako pozit\u00edvny, negat\u00edvny alebo invalidn\u00fd.<\/p>\n

Pou\u017eitie testu je indikovan\u00e9 pri nejasn\u00fdch cytologick\u00fdch n\u00e1lezoch ASC-US, ASC-H alebo u \u017eien star\u0161\u00edch ako 30 rokov aj pri opakovanom n\u00e1leze L-SIL. Taktie\u017e po lie\u010dbe prekancer\u00f3z, na pos\u00fadenie kone\u010dn\u00e9ho v\u00fdsledku lie\u010dby, respekt\u00edve na pos\u00fadenie, \u010di je u pacientok vhodn\u00e9 pokra\u010dova\u0165 v \u010fal\u0161ej diagnostike kolposkopiou alebo biopsiou.<\/p>\n

 <\/p>\n

Materi\u00e1l a met\u00f3dy<\/h3>\n

\u00a0<\/strong><\/p>\n

V\u00fdber a charakteristika s\u00faboru<\/h4>\n

Do s\u00faboru bolo zaraden\u00fdch spolu 3 463 pacientok, ktor\u00e9 boli vy\u0161etrovan\u00e9 v \u010dasovom obdob\u00ed od 1. janu\u00e1ra 2017 do 31. decembra 2017. Z celkov\u00e9ho ro\u010dn\u00e9ho s\u00faboru pacientok, ktor\u00e9 v na\u0161om laborat\u00f3riu diagnostikovali na pr\u00edtomnos\u0165 hrHPV met\u00f3dou na b\u00e1ze DNA alebo mRNA, boli do s\u00faboru zaraden\u00e9 len tie, ktor\u00e9 podst\u00fapili diagnostiku HPV raz za rok bez oh\u013eadu na opakovan\u00fd odber. \u0160tatistick\u00e1 anal\u00fdza taktie\u017e zah\u0155\u0148ala iba pacientky testovan\u00e9 na pr\u00edtomnos\u0165 hrHPV, ktor\u00fdch bunkov\u00e9 stery z endocervixu a exocervixu boli odobrat\u00e9 do odberovej s\u00fapravy ThinPrep Pap Test (<\/em>Preserv Cyt\u00ae Solution), pri\u010dom pri vy\u0161etren\u00ed pr\u00edtomnosti HPV bolo takmer ka\u017ed\u00e1 pacientka podst\u00fapila cervik\u00e1lne cytologick\u00e9 vy\u0161etrenie a cytologick\u00e9 v\u00fdsledky boli interpretovan\u00e9 pod\u013ea Bethesda klasifika\u010dn\u00e9ho syst\u00e9mu.<\/p>\n

Testovanie na b\u00e1ze DNA bolo realizovan\u00e9 na 2 126 vzork\u00e1ch a testovanie na b\u00e1ze mRNA bolo uskuto\u010dnen\u00e9 na 1 337 vzork\u00e1ch. Molekulovogenetick\u00fa anal\u00fdzu zameran\u00fa na detekciu pr\u00edtomnosti L1 g\u00e9nu met\u00f3dou na \u00farovni DNA sme vykonali u ka\u017edej z nich, pri\u010dom cytologick\u00e9 vy\u0161etrenie bolo uskuto\u010dnen\u00e9 celkovo u 2 113 pacientok. V 6 pr\u00edpadoch nebolo cytologick\u00e9 vy\u0161etrenie realizovan\u00e9 a v 7 pr\u00edpadoch bola adekv\u00e1tnos\u0165 vzorky nedosta\u010duj\u00faca na uskuto\u010dnenie anal\u00fdzy z d\u00f4vodov pr\u00edtomnosti krvi, z\u00e1palov\u00fdch elementov, hlienov, pomlia\u017eden\u00fdch buniek, pr\u00edpadne nespr\u00e1vnym odberom.<\/p>\n

Molekulovogenetick\u00fa anal\u00fdzu zameran\u00fa na detekciu pr\u00edtomnosti perzistentnej HPV infekcie met\u00f3dou na \u00farovni mRNA sme vykonali u ka\u017edej z nich, pri\u010dom cytologick\u00e9 vy\u0161etrenie bolo uskuto\u010dnen\u00e9 u 1 327 pacientok. V 7 pr\u00edpadoch bolo cytologick\u00e9 vy\u0161etrenie nerealizovan\u00e9 v\u00f4bec a v 7 pr\u00edpadoch bola adekv\u00e1tnos\u0165 vzorky nedosta\u010duj\u00faca na uskuto\u010dnenie anal\u00fdzy.<\/p>\n

 <\/p>\n

Odber biologick\u00e9ho materi\u00e1lu<\/h4>\n

Biologick\u00fd materi\u00e1l na molekulovogenetick\u00fa diagnostiku pr\u00edtomnosti hrHPV mo\u017eno odobra\u0165 do odberovej s\u00fapravy Thin Prep Pap Test (Preserv Cyt\u00ae Solution) alebo do odberovej s\u00fapravy Aptima\u00ae Cervical Specimen Collection Kit. Vzorky odobrat\u00e9 do odberov\u00fdch n\u00e1dobiek Preserv Cyt\u00ae Solution s\u00fa stabiln\u00e9 a vhodn\u00e9 na HPV anal\u00fdzu maxim\u00e1lne 30 dn\u00ed po odbere. LBC sa uchov\u00e1vaj\u00fa pri laborat\u00f3rnej teplote. Vzorky odobrat\u00e9 do prepravnej s\u00fapravy Aptima\u00ae s\u00fa stabiln\u00e9 a vhodn\u00e9 na HPV anal\u00fdzu maxim\u00e1lne 30 dn\u00ed po odbere, ak s\u00fa uchov\u00e1van\u00e9 pre teplote 2 \u2013 8 \u00b0C, a maxim\u00e1lne 14 dn\u00ed po odbere, ak s\u00fa uchov\u00e1van\u00e9 pri laborat\u00f3rnej teplote.<\/p>\n

 <\/p>\n

Met\u00f3dy<\/h4>\n

Na oddelen\u00ed lek\u00e1rskej genetiky v Medirexe, a. s., m\u00e1me dostupn\u00e9 dve testovacie platformy, platformu cobas\u00ae 4800 HPV od firmy Roche Molecular Diagnostics (CA, USA) a Aptima HPV Assay z firmy Hologic (CA, USA), pri\u010dom obe met\u00f3dy s\u00fa schopn\u00e9 detegova\u0165 pr\u00edtomnos\u0165 14 hrHPV typov (16, 18, 31, 33, 35, 39, 45, 51, 52, 56, 58, 59, 66, 68). Pr\u00edstroj cobas\u00ae 4800 deteguje amplik\u00f3ny HPV DNA dlh\u00e9 200 bp majoritn\u00e9ho kapsidov\u00e9ho prote\u00ednu L1 met\u00f3dou Real-Time PCR. Aptima HPV Assay test deteguje HPV E6 a E7 mRNA onkog\u00e9nnych transkriptov. Pok\u00fdm cobas\u00ae4800 deteguje hrHPV na \u00farovni DNA, Aptima HPV Assay deteguje hrHPV onkog\u00e9nnu mRNA expresiu a je navrhnut\u00fd na \u0161pecifickej\u0161ie vyhodnotenie pri identifik\u00e1cii v\u00fdznamn\u00fdch hrHPV infekci\u00ed, ktor\u00e1 vedie k CIN 2 a\u017e CIN 3(18).<\/p>\n

 <\/p>\n

V\u00fdsledky a \u0161tatistick\u00e9 vyhodnotenie<\/h4>\n

Cie\u013eom \u0161tatistick\u00e9ho vyhodnotenia bolo monitorovanie jednotliv\u00fdch n\u00e1lezov HPV infekcie a korel\u00e1cia s cytologick\u00fdmi n\u00e1lezmi u pacientok analyzovan\u00fdch molekulovogenetickou diagnostickou met\u00f3dou cobas\u00ae 4800 HPV a Aptima HPV Assay.<\/p>\n

 <\/p>\n

Diskusia<\/h3>\n

Predmetom na\u0161ej \u0161tatistickej anal\u00fdzy bolo vyhodnotenie pr\u00edtomnosti HPV infekcie pacientok s pr\u00edtomnou, respekt\u00edve nepr\u00edtomnou vysokorizikovou infekciou HPV. Infekcia hrHPV typmi je zodpovedn\u00e1 za vznik cervik\u00e1lneho karcin\u00f3mu, ktor\u00e9ho incidencia a mortalita je napriek mnoh\u00fdm prevent\u00edvnym a skr\u00edningov\u00fdm vy\u0161etreniam st\u00e1le vysok\u00e1.<\/p>\n

 <\/p>\n

HPV testovanie<\/h4>\n

V predlo\u017eenom s\u00fabore sme analyzovali spolu 3 463 pacientok, pri\u010dom so zn\u00e1mym v\u00fdsledkom z cytologick\u00e9ho vy\u0161etrenia sme analyzovali celkovo 3 440 pacientok. Molekulovogenetick\u00fa anal\u00fdza cobas\u00ae 4800 HPV sme pou\u017eili na identifik\u00e1ciu pr\u00edtomnosti hrHPV, a to v kateg\u00f3rii HPV 16, HPV 18 a ostatn\u00fdch hrHPV typov, pr\u00edpadne infekcie viacer\u00fdmi hrHPV typmi s\u00fa\u010dasne. V druhom pr\u00edpade sme vy\u0161etrovali na\u0161e pacientky met\u00f3dou Aptima HPV Assay, s cie\u013eom zistenia pr\u00edtomnosti perzistentnej formy v\u00edrusovej infekcie prostredn\u00edctvom detekcie expresie onkog\u00e9nnych prote\u00ednov E6 a E7 mRNA HPV. V roku 2017 sme v\u0161ak nezaznamenali na na\u0161om oddelen\u00ed \u017eiadnu pacientku, ktor\u00e1 by mala pozit\u00edvny n\u00e1dorov\u00fd n\u00e1lez \u2013 Ca (PAP V). Pre obe testovacie platformy boli celkov\u00e9 pomery hrHPV pozit\u00edvnych pribli\u017ene rovnak\u00e9 a signifikantne podobn\u00e9 rovnako, ako ud\u00e1va s\u00fabor pod\u013ea Ovestad et al., 2011(18).<\/p>\n

Prevalencia 14 hrHPV typov identifikovan\u00fdch pomocou oboch detek\u010dn\u00fdch met\u00f3d vidite\u013ene kles\u00e1 s rast\u00facim vekom. Najv\u00e4\u010d\u0161ie zast\u00fapenie mali pacientky vo veku 27 \u2013 34 rokov, \u010do m\u00f4\u017eeme sledova\u0165 na grafe 1<\/em><\/strong>, ktor\u00fd porovn\u00e1va po\u010det a vekov\u00e9 rozlo\u017eenie pacientok testovan\u00fdch DNA HPV testom\u00a0\u00a0 a mRNA HPV testom. Na druhej strane m\u00f4\u017eeme sledova\u0165, \u017ee najni\u017e\u0161ia prevalencia HPV pacientok je 67 \u2013 79 rokov. S porovnate\u013en\u00fdmi \u00fadajmi sme sa stretli aj pri pilotnej \u0161t\u00fadii, kde autori poukazuj\u00fa na to, \u017ee prevalencia HPV identifikovan\u00e1 pr\u00edstrojom cobas\u00ae 4800 HPV taktie\u017e kles\u00e1 s rast\u00facim vekom(21). Pri identifik\u00e1cii HPV bola pr\u00edtomnos\u0165 hrHPV identifikovan\u00e1 u 30,5 % \u017eien vo veku 21 \u2013 24 rokov, ale vo veku 40 \u2013 44 rokov prevalencia klesla na 7,6 % a pri \u017een\u00e1ch nad 70 rokov klesla prevalencia HPV na 5 %. Podobn\u00e9 zn\u00ed\u017eenie prevalencie HPV s rast\u00facim vekom zistili aj pri detekcii HPV 16 a HPV 18(19).<\/p>\n

Pr\u00e1ve graf 1 <\/em><\/strong>poukazuje na to, \u017ee v na\u0161om s\u00fabore sa nach\u00e1dzali \u017eeny od 17 do 79 rokov, pri\u010dom priemern\u00fd vek nami vy\u0161etren\u00fdch \u017eien bol v \u010dase odberu vzorky 38 rokov. Naj\u0161ir\u0161ie zast\u00fapenie v anal\u00fdze mali \u017eeny vo veku 27 \u2013 46 rokov. Na druhej strane graf 2 <\/em><\/strong>zobrazuje zast\u00fapenie jednotliv\u00fdch vekov\u00fdch skup\u00edn a poukazuje na pr\u00edtomnos\u0165 v\u00edrusovej infekcie potvrdenej testovan\u00edm pr\u00edtomnosti DNA HPV vzh\u013eadom na po\u010det v\u0161etk\u00fdch testovan\u00fdch vzoriek. Pr\u00edtomnos\u0165 v\u00edrusovej infekcie bola DNA HPV testom potvrden\u00e1 pri 853 vzork\u00e1ch, \u010do zodpovedalo 40 % v\u0161etk\u00fdch vy\u0161etrovan\u00fdch vzoriek, graf 3 <\/em><\/strong>poukazuje na pr\u00edtomnos\u0165 akt\u00edvnej formy v\u00edrusovej infekcie detegovanej met\u00f3dou na \u00farovni mRNA,\u00a0 ktor\u00e1 bola potvrden\u00e1\u00a0celkovo pri 628 vzork\u00e1ch, \u010do predstavovalo 47 % v\u0161etk\u00fdch vy\u0161etrovan\u00fdch vzoriek. Najv\u00e4\u010d\u0161ie zast\u00fapenie HPV pozit\u00edvnych pacientok bolo vo vekovej kateg\u00f3rii od 23 do 24 rokov, a to pri oboch testovac\u00edch platform\u00e1ch. Priemern\u00fd vek sa v\u0161ak mierne odli\u0161oval, a to nasledovne: pri DNA HPV teste bol priemern\u00fd vek v \u010dase odberu vzorky 33 rokov (minim\u00e1lny vek: 17, maxim\u00e1lny vek: 79) a pri mRNA HPV teste bol priemern\u00fd vek v \u010dase odberu vzorky 35 rokov (minim\u00e1lny vek: 17, maxim\u00e1lny vek: 82) (graf 4)<\/em><\/strong>.<\/p>\n

 <\/p>\n

Cytol\u00f3gia vs HPV testovanie<\/h4>\n

Celkovo bolo v na\u0161om s\u00fabore zaznamenan\u00fdch a\u017e 53 % vzoriek, ktor\u00e9 mali v\u00fdsledky z cervik\u00e1lnej cytol\u00f3gie negat\u00edvne (graf 5)<\/em><\/strong>. Z tohto po\u010dtu 27 % vzoriek malo negat\u00edvny cytologick\u00fd n\u00e1lez NILM a 26 % vzoriek bolo s cytologick\u00fdm n\u00e1lezom abnorm\u00e1lnych skvam\u00f3znych buniek, \u010do sa v\u0161ak pova\u017euje za negat\u00edvne vzh\u013eadom na nepr\u00edtomn\u00e9 cervik\u00e1lne intraepitelov\u00e9 neopl\u00e1zie (CIN). V porovnan\u00ed so \u0161t\u00fadiou, kde bolo analyzovan\u00fdch 46 887 \u017eien vo vekovom rozp\u00e4t\u00ed 21 \u2013 93 rokov, boli n\u00e1lezy vo viac ako 90 % negat\u00edvne v zmysle intraepitelovej l\u00e9zie a malignity(19). Prevalencia cytologick\u00e9ho n\u00e1lezu ASCUS a L-SIL bola 20 %, pri\u010dom najni\u017e\u0161iu prevalenciu mali cytologick\u00e9 n\u00e1lezy ASC-H a H-SIL, 4 % a 3 %. V porovnan\u00ed so \u0161t\u00fadiou m\u00e1me vy\u0161\u0161ie percento pacientok s n\u00e1lezom H-SIL a ASC-H, \u010do je v\u0161ak sp\u00f4soben\u00e9 omnoho ni\u017e\u0161\u00edm po\u010dtom analyzovan\u00fdch vzoriek.<\/p>\n

Podiel \u017eien pozit\u00edvnych na pr\u00edtomnos\u0165 v\u00edrusovej infekcie identifikovanej DNA HPV testom st\u00fapa s n\u00e1rastom stup\u0148a cervik\u00e1lnej cytol\u00f3gie. \u017den\u00e1m s cytologick\u00fdm n\u00e1lezom L-SIL, ASC-H a H-SIL je preuk\u00e1zan\u00fd vy\u0161\u0161\u00ed po\u010det pozit\u00edvnych pr\u00edpadov oproti negat\u00edvnym pr\u00edpadom (graf 6)<\/em><\/strong>. Z celkov\u00e9ho po\u010dtu 441 \u017eien s n\u00e1lezom L-SIL, bola HPV DNA pozitivita zaznamenan\u00e1 v 80 % pr\u00edpadov a mRNA HPV pozitivita v 74 % pr\u00edpadov. Taktie\u017e pri n\u00e1leze ASC-H sme zaznamenali 86 % (DNA) a 76 % (mRNA) a n\u00e1leze H-SIL \u2013 81 % (DNA) a 93 % (mRNA).<\/p>\n

Takisto v porovnan\u00ed so \u0161t\u00fadiou, kde \u017eeny s n\u00e1lezom CIN 1 predstavovali 65,5 % a s n\u00e1lezom CIN 2 83,3 % a CIN 3 92,6 %. V analyzovanom s\u00fabore pacientok bola hrHPV DNA detegovan\u00e1 v 846 pr\u00edpadoch, \u010do predstavuje 40 % z celkov\u00e9ho s\u00faboru. U \u017eien s cytologick\u00fdmi n\u00e1lezmi NILM, SBA, ASC-US preva\u017euj\u00fa HPV negat\u00edvne v\u00fdsledky. Naj\u010dastej\u0161ie bola detegovan\u00e1 kateg\u00f3ria tzv. in\u00fdch HPV v 513 pr\u00edpadoch, \u010do predstavuje 61 %. \u010eal\u0161ia naj\u010dastej\u0161ie detegovan\u00e1 bola infekcia typom HPV 16 a koinfekcia HPV 16 spolu s niektor\u00fdm z in\u00fdch hrHPV. Kombin\u00e1cia HPV 16 a HPV 18 bola pr\u00edtomn\u00e1 len u 0,7 % v\u0161etk\u00fdch pacientok. Pomocou molekul\u00e1rnogenetick\u00e9ho testu cobas\u00ae 4800 HPV u pacientok s negat\u00edvnou cytol\u00f3giou (NILM) <\/strong>nebola hrHPV DNA identifikovan\u00e1 vo v\u00e4\u010d\u0161ine pr\u00edpadov. V 90 pr\u00edpadoch bola pr\u00edtomn\u00e1 DNA ostat- n\u00fdch hrHPV, v 2 pr\u00edpadoch prisl\u00fachal v\u00fdsledok kombin\u00e1cii HPV 18 s ostatn\u00fdmi hrHPV a kombin\u00e1cii HPV 16 a HPV 18\u00a0(graf 7)<\/em><\/strong>.<\/p>\n

U cytologicky negat\u00edvnych pacientok bola z celkov\u00e9ho s\u00faboru 641 \u017eien pr\u00edtomn\u00e1 infekcia HPV u 137. HrHPV boli diagnostikovan\u00e9 v 90 pr\u00edpadoch, naproti tomu HPV 18 s ostatn\u00fdmi hrHPV a HPV 16 s HPV 18 len v 2 pr\u00edpadoch. Cytologick\u00e9 v\u00fdsledky SBA (graf 8) <\/em><\/strong>koreluj\u00fa s cytologick\u00fdmi v\u00fdsledkami NILM. No s t\u00fdmto v\u00fdsledkom sa v \u017eiadnom z pr\u00edpadov nevskytla kombin\u00e1cia HPV 16, HPV 18 a in\u00fdch hrHPV. HPV negat\u00edvne v\u00fdsledky predstavuj\u00fa 76 %.<\/p>\n

V 364 steroch cytologicky diagnostikovan\u00fdch ako ASC-US <\/strong>bola identifikovan\u00e1 v\u00edrusov\u00e1 DNA ostatn\u00fdch hrHPV v 109 pr\u00edpadoch, v 20 pr\u00edpadoch HPV 16 a HPV 16 s ostatn\u00fdmi hrHPV, v 7 pr\u00edpadoch HPV 18, v 5 pr\u00edpadoch kombin\u00e1cia HPV 18 a ostatn\u00fdch hrHPV. Len v 1 pr\u00edpade kombin\u00e1cia v\u0161etk\u00fdch hrHPV. Kombin\u00e1cia HPV 16 s HPV 18 sa nevyskytla u \u017eiadnej pacientky (graf 9)<\/em><\/strong>. Najviac v\u0161ak boli HPV negat\u00edvne pacientky.<\/p>\n

U 414 pacientok s diagnostikovan\u00fdm L-SIL <\/strong>nebola hrHPV detegovan\u00e1 v 89 pr\u00edpadoch, v 190 bola preuk\u00e1zan\u00e1 DNA ostatn\u00fdch hrHPV a len v jednom pr\u00edpade kombin\u00e1cia HPV 16 s HPV 18 (graf 10) <\/em><\/strong>U pacientok s cytologick\u00fdm n\u00e1lezom ASC-H <\/strong>sa pribli\u017ene v rovnakom zast\u00fapen\u00ed vyskytovali ostatn\u00e9 hrHPV, HPV 16 a HPV 16 v kombin\u00e1cii s hrHPV. Ani u jedenej z pacientok sa nedetegovala s\u00fa\u010dasn\u00e1 pr\u00edtomnos\u0165 HPV 16 s HPV 18 (graf 11) <\/em><\/strong>Cytologick\u00fd n\u00e1lez H-SIL <\/strong>bol najviac asociovan\u00fd s pr\u00edtomnos\u0165ou HPV 16. V \u017eiadnom v\u00fdsledku nebola pozorovan\u00e1 pr\u00edtomnos\u0165 HPV 18 a HPV 18 v kombin\u00e1cii s ostatn\u00fdmi hrHPV (graf 12)<\/em><\/strong>.<\/p>\n

Z na\u0161ich v\u00fdsledkov vypl\u00fdva, \u017ee test Aptima HPV Assay m\u00e1 v\u00fdznamne vy\u0161\u0161iu \u0161pecificitu v predikcii CIN 2 v porovnan\u00ed s testom cobas\u00ae 4800 HPV (2,6 % vs 1,6 %)(18). Rovnak\u00e1 priazniv\u00e1 \u0161pecificita zisten\u00e1 oboma testovac\u00edmi platformami bola potvrden\u00e1 aj u Ge et al., 2017. Neust\u00e1le nov\u00e9 vznikaj\u00face \u0161t\u00fadie nazna\u010duj\u00fa, \u017ee mRNA HPV testy s\u00fa vo v\u0161eobecnosti \u0161pecifickej\u0161ie (97 %) ako DNA testy, najm\u00e4 pri detekcii cervik\u00e1lnych l\u00e9zi\u00ed vy\u0161\u0161\u00edch stup\u0148ov(16,19).<\/p>\n

Z\u00e1ver<\/h3>\n

Napriek tomu, \u017ee cytol\u00f3gia je zatia\u013e neoddelite\u013enou s\u00fa\u010das\u0165ou skr\u00edningu rakoviny kr\u010dka maternice, m\u00e1 nieko\u013eko limitov. Patr\u00ed tam pomerne n\u00edzka reprodukovate\u013enos\u0165 pri n\u00e1lezoch ASC-US a L-SIL, n\u00edzka \u0161pecifickos\u0165 ASC-US pre kancer\u00f3zne n\u00e1lezy, nutnos\u0165 vy\u0161\u0161ej frekvencie skr\u00edningov\u00fdch kontrol, ktor\u00e1 mus\u00ed by\u0165 minim\u00e1lne 2 \u2013 3 roky a falo\u0161n\u00e1 negativita a\u017e do 30 %. V porovnan\u00ed s cytol\u00f3giou m\u00e1 HPV test vy\u0161\u0161iu a dlh\u0161ie trvaj\u00facu predikt\u00edvnu hodnotu, zni\u017euje incidenciu karcin\u00f3mu u\u017e po\u010das 4-5 rokov, m\u00e1 o 20 \u2013 45 % vy\u0161\u0161iu senzitivitu pre detekciu CIN, ale ni\u017e\u0161iu \u0161pecificitu (HPV pozitivita je asi 2x \u010dastej\u0161ia)(22). Negat\u00edvny v\u00fdsledok DNA HPV testu taktie\u017e poskytuje istotu, \u017ee CIN 3 sa nevyvinie v priebehu 3 rokov, na rozdiel od negat\u00edvnej cytol\u00f3gie.<\/p>\n

V bl\u00edzkej\u00a0 bud\u00facnosti\u00a0 v\u0161ak\u00a0 m\u00f4\u017eeme\u00a0 o\u010dak\u00e1va\u0165\u00a0 zmenu v skr\u00edningovom programe rakoviny kr\u010dka maternice. Cytologick\u00e9 vy\u0161etrenie bolo za posledn\u00e9 roky pre mnoh\u00e9 \u017eeny z\u00e1kladn\u00fdm bodom prevencie, av\u0161ak z d\u00f4vodu n\u00edzkej senzitivity tohto vy\u0161etrenia pri detekcii z\u00e1va\u017en\u00fdch prekancer\u00f3z bude nahraden\u00e9 senzit\u00edvnej\u0161\u00edm skr\u00edningov\u00fdm molekulovogenetick\u00fdm vy\u0161etren\u00edm, ktor\u00e9 deteguje pr\u00edtomnos\u0165 hrHPV typov u pacientky.<\/p>\n

 <\/p>\n

LITERAT\u00daRA<\/strong><\/p>\n

    \n
  1. Doorbar Molecular biology of human papillomavirus infection and cervical cancer. Clinical science 2006; 110(5): 525-541.<\/li>\n
  2. Belleudi F, Nanni M, Raffa S, Torrisi HPV16 E5 deregulates the autophagic process in human keratinocytes. Oncotarget 2015; 6(11): 9370.<\/li>\n
  3. De Villiers EM, Fauquet C, Broker TR, et , Classification of papillomaviruses. Virology 2004; 324(1): 17-27.<\/li>\n
  4. de Sanjose S, Quint WG, Alemany L, et Human papillomavirus genotype attribution in invasive cervical cancer: a retrospective cross-sectional worldwide study. The lancet oncology 2010; 11(11): 1048-1056.<\/li>\n
  5. https:\/\/benthamopen.com\/FULLTEXT\/TOVJ-5-80\/FIGURE\/F1\/<\/a><\/li>\n
  6. Bzhalava D, Guan P, Franceschi S, et A systematic review of the prevalence of mucosal and cutaneous human papillomavirus types. Virology 2013; 445(1-2): 224-231.<\/li>\n
  7. Burd Human papillomavirus and cervical cancer. Clinical micro- biology reviews 2003; 16(1): 1-7.<\/li>\n
  8. Workowski KA, Bolan GA. Sexually transmitted diseases treatment guidelines, MMWR. Recommendations and reports: Morbidity and mortality weekly report. Recommendations and reports 2015; 64(RR-03): 1.<\/li>\n
  9. Burchell AN, Winer RL, de Sanjos\u00e9 S, Franco EL. Epidemiology and transmission dynamics of genital HPV Vaccine 2006; 24: S52-61.<\/li>\n
  10. Ogbonna Knowledge, attitude, and experience of cervical cancer and screening among Sub-saharan African female students in a UK University. Annals of African medicine 2017; 16(1): 18.<\/li>\n
  11. Gadducci A, Barsotti C, Cosio S, et Smoking habit, immune suppression, oral contraceptive use, and hormone replacement therapy use and cervical carcinogenesis: a review of the literature. Gynecological Endocrinology 2011; 27(8): 597-604.<\/li>\n
  12. Barbosa MS, Vass WC, Lowy DR, Schiller In vitro biological activities of the E6 and E7 genes vary among human papillomaviruses of differ- ent oncogenic potential. Journal of virology 1991; 65(1): 292.<\/li>\n
  13. https:\/\/slideplayer.com\/slide\/6096296\/<\/a><\/li>\n
  14. Chorny JA, Frye TC, Fisher BL, Remmers Human papillomavirus detection with genotyping by the cobas and Aptima assays: Significant differences in HPV 16 detection?. Diagn Cytopathol 2018; 46(7): 568-571.<\/li>\n
  15. Redecha M, Korbe\u013e Rakovina maternicov\u00e9ho kr\u010dka a mo\u017enosti jej prevencie. Ambulantn\u00e1 terapia 2007; 5(3-4): 176-180.<\/li>\n
  16. http:\/\/www.roche.sk\/content\/dam\/roche_slovakia\/sk_SK\/docu-<\/a> ments\/cobas_4800_HPV_test_sk.pdf<\/a><\/li>\n
  17. https:\/\/www.hologic.com\/sites\/default\/files\/package-insert\/AW-<\/a> 14517-001_003_01.pdf<\/a><\/li>\n
  18. Ovestad IT, Vennestr\u00f8m U, Andersen L, et Comparison of different commercial methods for HPV detection in follow-up cytology after ASCUS\/LSIL, prediction of CIN2\u20133 in follow up biopsies and spontaneous regression of CIN2\u20133. Gynecologic oncology 2011; 123(2): 278-283.<\/li>\n
  19. Wright Jr TC, Stoler MH, Behrens CM, et The ATHENA human papillomavirus study: design, methods, and baseline results. American jour- nal of obstetrics and gynecology 2012; 206(1): 46-e1.<\/li>\n
  20. https:\/\/www.kkh.com.sg\/HealthPedia\/Pages\/GynaecologicalCan-<\/a> aspx<\/a><\/li>\n
  21. Schiffman M, Wentzensen N, Wacholder, et Human papillomavirus testing in the prevention of cervical cancer. Journal of the National Cancer Institute 2011; 103(5): 368-383.<\/li>\n
  22. Rebolj M, Bonde J, Preisler S, et al. Human papillomavirus assays and cytology in primary cervical screening of women aged 30 years and above. PLoS One 2016; 11(1):<\/li>\n
  23. Arbyn M, Roelens J, Cuschieri K, et The APTIMA HPV assay versus the Hybrid Capture 2 test in triage of women with ASC\u2010US or LSIL cervical cytology: a meta\u2010analysis of the diagnostic accuracy. International journal of cancer 2013; 132(1): 101-108.<\/li>\n<\/ol>\n","protected":false},"excerpt":{"rendered":"

    *All tables, charts, graphs and pictures that are featured in this article can be found in the .pdf attachment at the end of the paper.   \u00davod V s\u00fa\u010dasnosti sa \u013eudsk\u00fd papilomav\u00edrus (HPV \u2013 Human Papillomavirus) pova\u017euje za z\u00e1kladn\u00fd etiologick\u00fd faktor sp\u00f4sobuj\u00faci rakovinu kr\u010dka maternice, preto\u017ee bez infekcie HPV nie je mo\u017en\u00fd v\u00fdvoj prekancer\u00f3znych stavov<\/p>\n","protected":false},"author":7,"featured_media":0,"comment_status":"open","ping_status":"open","sticky":false,"template":"","format":"standard","meta":{"_mi_skip_tracking":false,"footnotes":""},"categories":[290],"tags":[965,967,716,966],"class_list":["post-1534","post","type-post","status-publish","format-standard","hentry","category-genetics","tag-aptima-hpv-assay","tag-cin","tag-hpv","tag-skrining-rakoviny-krcka-maternice","typ_clanku-original-work"],"acf":{"abstrakt":"

    Human papillomaviruses (HPV) are considered to be a significant etiological factor responsible for over 99.7 % of all cervical carcinomas, while 14 of HPV types being considered as oncogenic. Persistent infection by highrisk HPV types leads to epithelial cell changes, to the development of precancerous lesions, eventually to cervical carcinoma. For the period from January 1 to December 31, 2017, we analysed 3463 patients who underwent of cervical cytology examination and then DNA-based HPV molecular diagnostics were screened by cobas\u00ae 4800 HPV (Roche Molecular Diagnostics, CA, USA) and based mRNA, were screened by Aptima HPV assay (Hologic, CA, USA). Our statistical analysis aimed to evaluate the expression of hrHPV in both molecular methods and their correlation with individual cytological findings. In the future, early detection of HPV in cervical cells would ensure better prognosis and, consequently, more effective treatment of precancerous conditions in a patient.<\/p>\n

    Keywords:<\/strong> HPV, CIN, cobas\u00ae 4800 HPV, Aptima HPV Assay, cervical screening<\/p>\n","casopis":[{"ID":1513,"post_author":"7","post_date":"2018-11-05 11:53:53","post_date_gmt":"2018-11-05 10:53:53","post_content":"

      \r\n \t
    • Genetically important aberrations in patients with mye-lodysplastic syndrome and laboratory methods of their detection<\/li>\r\n \t
    • Molecular \u2013 genetic diagnostics of Human Papillomavirus (HPV) and monitoring of HPV patients<\/li>\r\n \t
    • Laboratory diagnostic possibilities for Clostridium difficile infections<\/li>\r\n \t
    • Chorangiosis of Placenta - Disorder of Unclear Etiology (Case Report and Overview of Current Knowledge)<\/li>\r\n \t
    • Circulating tumor DNA and its utilization as marker with prognostic, predictive and diagnostic value in patients with oncological diseases<\/li>\r\n<\/ul>","post_title":"newsLab","post_excerpt":"","post_status":"publish","comment_status":"closed","ping_status":"closed","post_password":"","post_name":"newslab-2","to_ping":"","pinged":"","post_modified":"2018-11-05 11:57:18","post_modified_gmt":"2018-11-05 10:57:18","post_content_filtered":"","post_parent":0,"guid":"http:\/\/www.newslab.sk\/casopis\/newslab-2\/","menu_order":0,"post_type":"casopis","post_mime_type":"","comment_count":"0","filter":"raw"}],"strana":"72","upload_clanok":{"ID":1539,"id":1539,"title":"Molekulovogenetick\u00e1 diagnostika \u013eudsk\u00e9ho papilomav\u00edrusu (HPV)","filename":"Molekulovogenetick\u00e1-diagnostika-\u013eudsk\u00e9ho-papilomav\u00edrusu-HPV.pdf","filesize":903899,"url":"https:\/\/www.newslab.sk\/wp-content\/uploads\/2018\/11\/Molekulovogenetick\u00e1-diagnostika-\u013eudsk\u00e9ho-papilomav\u00edrusu-HPV.pdf","link":"https:\/\/www.newslab.sk\/en\/molecular-genetic-diagnostics-of-human-papillomavirus-hpv-and-monitoring-of-hpv-patients\/molekulovogeneticka-diagnostika-ludskeho-papilomavirusu-hpv-2\/","alt":"","author":"7","description":"","caption":"","name":"molekulovogeneticka-diagnostika-ludskeho-papilomavirusu-hpv-2","status":"inherit","uploaded_to":1534,"date":"2018-11-11 11:25:12","modified":"2018-11-11 11:25:12","menu_order":0,"mime_type":"application\/pdf","type":"application","subtype":"pdf","icon":"https:\/\/www.newslab.sk\/wp-includes\/images\/media\/document.png"}},"_links":{"self":[{"href":"https:\/\/www.newslab.sk\/en\/wp-json\/wp\/v2\/posts\/1534","targetHints":{"allow":["GET"]}}],"collection":[{"href":"https:\/\/www.newslab.sk\/en\/wp-json\/wp\/v2\/posts"}],"about":[{"href":"https:\/\/www.newslab.sk\/en\/wp-json\/wp\/v2\/types\/post"}],"author":[{"embeddable":true,"href":"https:\/\/www.newslab.sk\/en\/wp-json\/wp\/v2\/users\/7"}],"replies":[{"embeddable":true,"href":"https:\/\/www.newslab.sk\/en\/wp-json\/wp\/v2\/comments?post=1534"}],"version-history":[{"count":0,"href":"https:\/\/www.newslab.sk\/en\/wp-json\/wp\/v2\/posts\/1534\/revisions"}],"wp:attachment":[{"href":"https:\/\/www.newslab.sk\/en\/wp-json\/wp\/v2\/media?parent=1534"}],"wp:term":[{"taxonomy":"category","embeddable":true,"href":"https:\/\/www.newslab.sk\/en\/wp-json\/wp\/v2\/categories?post=1534"},{"taxonomy":"post_tag","embeddable":true,"href":"https:\/\/www.newslab.sk\/en\/wp-json\/wp\/v2\/tags?post=1534"}],"curies":[{"name":"wp","href":"https:\/\/api.w.org\/{rel}","templated":true}]}}